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機(jī)體的特異性免疫反應(yīng)
當(dāng)外來的抗原物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體后,機(jī)體在抗原物質(zhì)刺激下,產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫的過程,就是機(jī)體的特異性免疫反應(yīng)。一定量的抗原物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體后,如何使機(jī)體的免疫器官和免疫細(xì)胞發(fā)生特異性免疫反應(yīng)(包括細(xì)胞免疫與體液免疫)產(chǎn)生特異性抗體呢?
抗原初次進(jìn)入機(jī)體后,立即被巨噬細(xì)胞所吞噬,大多被分解為免疫碎片,再與巨噬細(xì)胞的mRNA結(jié)合形成復(fù)合體,從吞噬細(xì)胞內(nèi)釋放出來。這種被吞噬細(xì)胞處理過的抗原,刺激T細(xì)胞和B細(xì)胞,使它們大部分分別轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞和漿母細(xì)胞,從而產(chǎn)生出更多的致敏淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞,其中一部分受抗原刺激后中途停止分化,而成為記憶細(xì)胞,這些記憶細(xì)胞在抗原刺激終止后數(shù)月甚至數(shù)年,還能與再次進(jìn)入機(jī)體的相同抗原起繼發(fā)性免疫反應(yīng)。
T細(xì)胞受到抗原刺激后,便轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞和致敏淋巴細(xì)胞,再次接確同種抗原,可產(chǎn)生巨噬細(xì)胞移動抑制因子、巨噬細(xì)胞武裝因子和淋巴毒素等各種淋巴激活素,形成細(xì)胞免疫反應(yīng)。
B細(xì)胞受到抗原刺激后,就增生分化成漿母細(xì)胞和漿細(xì)胞,產(chǎn)生并分泌特異性抗體(免疫球蛋白),形成體液免疫反應(yīng)。
當(dāng)然,抗原進(jìn)入機(jī)體后,與機(jī)體免疫活性細(xì)胞起作用的僅是一部分,還有一部分被機(jī)體代謝器官所排除。
抗原與淋巴細(xì)胞接觸產(chǎn)生免疫反應(yīng)的方式有多種:抗原可先與巨噬細(xì)胞作用,然后再傳遞給淋巴細(xì)胞,也可直接與淋巴細(xì)胞(包括T細(xì)胞和B細(xì)胞)作用,發(fā)生免疫反應(yīng)??乖镔|(zhì)刺激機(jī)體后,抗體的產(chǎn)生有一定的規(guī)律,即抗原進(jìn)入機(jī)體后,首先經(jīng)過一段潛伏期,然后抗體含量逐漸增多,達(dá)到高峰后,暫時維持一定的時間,以后抗體含量又逐步下降,完成初次反應(yīng)的階段。當(dāng)同樣的抗原第二次再刺激機(jī)體后,抗體含量上升速度比初次反應(yīng)速度快,并且峰值也較前次為高,高峰持續(xù)時間也較長,形成再次反應(yīng)階段。
如果在抗體含量為zui高時,一般情況就能得到價的抗血清,經(jīng)過采血,如不注射同樣抗原,機(jī)體產(chǎn)生抗體的能力就會日漸下降,但是,如果動物休息相當(dāng)長的時間,例如2-3個月后,再次注射同樣的少量抗原,它的抗體含量會很快上升,能重新獲得價抗血清。機(jī)體的特異性免疫反應(yīng)與抗體的形成直接相關(guān),因此,注意在抗原刺激下影響機(jī)體產(chǎn)生抗體的因素尤為重要。
應(yīng)特別注意選擇合適的動物。免疫有物動物,年齡、體重和性別均要考慮。作為免疫用的動物年齡太小,免疫系統(tǒng)發(fā)育還不健全,會影響抗體的形成;年齡太大因代謝機(jī)能衰弱,也會影響抗體的形成。因此,對于實(shí)驗(yàn)室常用的家兔選擇兔齡為9-24個月,體重為2-2.5kg,耳朵大,靜脈粗,無腳癬的健康雄性白兔。
采用合適抗原劑量??乖瓌┝刻?,會產(chǎn)生免疫麻痹;太小,會無法刺激機(jī)體反應(yīng),并且多次低劑量注射所造成的免疫麻痹,比一次大劑量所造成的免疫麻痹要嚴(yán)重得多,均不利于抗體的形成。對于抗原刺激B細(xì)胞的反應(yīng)來說,要使B細(xì)胞產(chǎn)生大量抗體,就必須注射合適的抗原劑量。
挑選合適的注射途徑和部位??乖M(jìn)入機(jī)體的途徑多種多樣,例如肌肉、皮內(nèi)、皮下、淋巴結(jié)、靜脈、腳掌和腹腔內(nèi)等。經(jīng)常采用的有兩種途徑:一種肌肉注射,另一種是靜脈注射,如果兩種途徑交替使用,那么應(yīng)先靜脈注射后肌肉注射,這樣有利于機(jī)體產(chǎn)生價的抗體。對于某一途徑,例如,肌肉注射時,常在不同肌肉部位進(jìn)行多點(diǎn)注射,免疫效果也較好。采用什么途徑注射,與抗原的性質(zhì)有關(guān),對于某些病毒例如蕪菁花葉病毒,由于在純化時加入了許多化學(xué)物質(zhì)就不適宜靜脈注射。另外,為了防止動物的注射點(diǎn)發(fā)火,一般每個注射點(diǎn)的劑量不應(yīng)大于0.5ml.
輔之合適的佐劑。為了使抗原在機(jī)體內(nèi)慢慢釋放出來,延長抗原在機(jī)體內(nèi)的停留時間,從而使產(chǎn)生抗體的初次反應(yīng)和再次反應(yīng)結(jié)合在一起,常常在抗原中加入佐劑,并與抗原充分混合,一起注入動物體內(nèi)。常用的佐劑有:福氏佐劑(Freund's adjuvant)和明礬佐劑。福氏佐劑由石蠟油和羊毛脂混合而成,它們的比例要按情況而定。福氏佐劑又分為*和非*兩種。所謂*福氏佐劑就是在福氏佐劑中加入熱滅活的分枝桿菌,例如卡介苗或酪酐菌等,否則,就是非*福氏佐劑。使用福氏佐劑時一定要使油包水的過程(即乳化)*,否則就不能起佐劑作用。明礬佐劑不好福氏佐劑常用,但當(dāng)實(shí)驗(yàn)室缺乏羊毛脂,或者在加入某一病毒后佐劑難以乳化時,明礬佐劑也可以采用(配方參閱附錄)。用于人類的佐劑通常以抗原沉淀物的形式吸附在硫酸鋁鉀或氫氧化鋁上,加入滅活的百日咳博德特氏菌來提高抗原的免疫性。