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SDS-PAGE濃縮膠緩沖液(4×)說(shuō)明書(shū)
Stacking Gel Solution (4×)
目錄號(hào):K0025
保存條件:2-8℃保存。
組分說(shuō)明
Cat No. K0025A
Volume 200 ml
本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本產(chǎn)品為配制 SDS-PAGE濃縮膠緩沖液,可用于配制各種濃度的變性及非變性
PAGE凝膠,方便、快捷。產(chǎn)品中已加入10%SDS,使用時(shí)不用另外加入。
操作步驟
根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度,Z*佳膠濃度請(qǐng)參考附表1。
I 灌制分離膠(各試劑使用量請(qǐng)參考附表2)
1.參照凝膠模具說(shuō)明書(shū),裝配好凝膠模具。
注:加入上層篩板有助于加樣時(shí)保持填料與樣品均勻接觸,是否加入上層篩板可根據(jù)實(shí)際情況選擇。
2.將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、分離膠緩沖液和雙蒸水在小燒杯或試管中混合。
3.加入10%APS和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產(chǎn)生氣泡。
4.在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對(duì)于 mini-gel,凝膠液加至約距前玻璃板頂端
1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可),然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層,
使凝膠表面保持平整。
5.靜置30-60分鐘,待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后,表面凝膠已聚合。
II灌制濃縮膠(各試劑使用量請(qǐng)參考附表3)
1.去除覆蓋在分離膠上的水層。
2.將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、濃縮膠緩沖液和雙蒸水在一個(gè)小燒杯或試管中混
合。
3.加入10%過(guò)硫酸銨和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產(chǎn)生氣泡。
4.將濃縮膠溶液加至分離膠的上面,直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端。
5.將梳子插入凝膠內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。
6.靜置10~20分鐘,等待濃縮膠聚合。
7.待凝膠聚合后,小心地拔出梳子,以免破壞加樣孔。
8.進(jìn)行常規(guī)電泳操作。
附表
附表1. SDS-PAGE分離膠的濃度與Z*佳分離范圍
SDS-PAGE分離膠濃度 *J分離范圍
6%膠 50-150 kD
8%膠 30-90 kD
10%膠 20-80 kD
12%膠 12-60 kD
15%膠 10-40 kD